漢騰生物在動(dòng)物細(xì)胞系的馴化，優(yōu)化和開(kāi)發(fā)方面，擁有行業(yè)領(lǐng)先的知識(shí)、專利技術(shù)儲(chǔ)備以及豐富的項(xiàng)目技術(shù)經(jīng)驗(yàn)。目前，漢騰生物與其歐洲子公司FyoniBio GmbH聯(lián)合推出CHOzen®和GLYCOEXPRESS® (GEX®)細(xì)胞系，背景資料完整，來(lái)源清晰，能夠滿足客戶多樣化的需求，可提供靈活的定制化服務(wù)。
CHOzen® 細(xì)胞系技術(shù)平臺(tái)包含長(zhǎng)期懸浮馴化的CHO-K1及CHO-DG44細(xì)胞株，適合單抗，雙抗，融合蛋白等多種重組生物大分子蛋白表達(dá)及穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建的需求。憑借漢騰卓越的自有表達(dá)載體設(shè)計(jì)及克隆開(kāi)發(fā)技術(shù)體系，可構(gòu)建出單位體積產(chǎn)量超過(guò)10g/L的高產(chǎn)細(xì)胞株，工藝優(yōu)化后可突破20g/L。此外，漢騰生物歐洲團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的GLYCOEXPRESS® (GEX®)細(xì)胞系平臺(tái)，源自人類髓性白血病細(xì)胞系，可賦予天然蛋白、抗體、融合蛋白等多種重組生物大分子蛋白復(fù)雜人源糖基化特征，并排除非人源糖基化特征的負(fù)面影響。同時(shí)漢騰生物技術(shù)團(tuán)隊(duì)還利用細(xì)胞工程、生物信息學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)及合成生物學(xué)技術(shù)，開(kāi)發(fā)出三種針對(duì)不同糖型修飾的細(xì)胞系，可定制化高效生產(chǎn)復(fù)雜糖蛋白。結(jié)合該平臺(tái)配套的自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的表達(dá)載體，培養(yǎng)基體系及培養(yǎng)工藝，我們能為客戶提供靈活的定制化服務(wù)和完整的開(kāi)發(fā)策略。
CHOzen® 細(xì)胞系——最經(jīng)典卻并不平凡的細(xì)胞系平臺(tái)
細(xì)胞株在生物制造工藝中具有舉足輕重的地位，穩(wěn)定，高產(chǎn)的細(xì)胞株能夠降低生產(chǎn)工藝的復(fù)雜度以及成本，賦予生產(chǎn)工藝更高的效率并帶來(lái)更高的生物制品利潤(rùn)。因此，歷史背景清晰，可開(kāi)發(fā)性強(qiáng)的宿主細(xì)胞系顯得尤為重要。
CHO細(xì)胞又稱中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞，最早由T.Puck教授于1957年從中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢中提取獲得，1958年細(xì)胞被進(jìn)行克隆后，得到原始CHO-ori細(xì)胞系。
CHO-K1細(xì)胞株源自于原始CHO-ori細(xì)胞系的一個(gè)亞克隆，是未經(jīng)改造的野生型CHO細(xì)胞，其于1970年被分離后存放于ATCC（CCL-61）。1985年，ATCCCHO-K1的一個(gè)亞克隆被分離后保存于ECACC（85051005）。漢騰生物的CHO-K1來(lái)源于ECACC，并通過(guò)長(zhǎng)期馴化適應(yīng)于無(wú)血清懸浮培養(yǎng)的CD培養(yǎng)基中，其生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞株產(chǎn)量高，穩(wěn)定性良好，并已在單抗、重組蛋白以及生物類似藥項(xiàng)目中廣泛使用。
圖1 生物制藥工業(yè)生產(chǎn)糖蛋白的表達(dá)系統(tǒng)
CHO-DG44細(xì)胞株來(lái)源于哥倫比亞大學(xué)Lawrence Chasin實(shí)驗(yàn)室，是雙等位DHFR基因敲除的CHO宿主細(xì)胞株，完全缺失DHFR基因的活性。使得MTX加壓篩選過(guò)程更加有效，產(chǎn)量提升更加顯著。經(jīng)過(guò)漢騰國(guó)內(nèi)外團(tuán)隊(duì)的長(zhǎng)期馴化后，已適應(yīng)無(wú)血清懸浮培養(yǎng)及高產(chǎn)量重組蛋白的表達(dá)。CHO-DG44屬于最早廣泛用于工業(yè)蛋白生產(chǎn)的CHO細(xì)胞系之一。目前仍然在國(guó)際上被廣泛使用于治療性重組蛋白產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。CHOzen®細(xì)胞系中的CHO-K1，CHO-DG44細(xì)胞株具有不同的生長(zhǎng)特性，代謝活動(dòng)和翻譯后修飾，可根據(jù)目標(biāo)蛋白情況選擇以滿足不同項(xiàng)目需求。
GEX®細(xì)胞系——專門針對(duì)不同糖基化修飾需求的細(xì)胞系平臺(tái)
目前，在生物藥研發(fā)與生產(chǎn)中，糖蛋白大多在CHO細(xì)胞等鼠源細(xì)胞系中進(jìn)行，但嚙齒動(dòng)物生產(chǎn)系統(tǒng)（CHO 和 BHK）缺乏 α2-6 唾液酸化途徑，只能產(chǎn)生具有免疫原性 NeuGc修飾來(lái)代替 NeuAc，致使生物藥的安全性方面的擔(dān)憂。
GEX®系列細(xì)胞系具有不同程度的糖基化修飾傾向，如唾液酸化和巖藻糖糖基化的調(diào)整以及改善的半乳糖基化水平和分支模式。
圖2 特定的蛋白糖基化類型對(duì)生物大分子蛋白的影響
漢騰技術(shù)團(tuán)隊(duì)在原始GEX-mAbExpress的基礎(chǔ)上通過(guò)細(xì)胞工程、生物信息學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)及合成生物學(xué)等技術(shù)，開(kāi)發(fā)出SIALOMAX®、FUCOFLEX®、SIALOFLEX®三種針對(duì)不同糖型修飾類型的細(xì)胞系，可定制化高效生產(chǎn)復(fù)雜糖蛋白。其中：
SIALOMAX® 適用于高唾液酸含量的蛋白
FUCOFLEX® 適用于需調(diào)控巖藻糖含量的蛋白
SIALOFLEX® 適用于需調(diào)控唾液酸含量的蛋白項(xiàng)目
圖3 GLYCOEXPRESS® 系列細(xì)胞系滿足不同糖基化需求
此外，GEX®細(xì)胞系技術(shù)平臺(tái)開(kāi)發(fā)了流加批次培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)生產(chǎn)工藝。目前IgG產(chǎn)量可達(dá)30g/L、IgA可達(dá)15g/L、雙抗可達(dá)5g/L、重組血液因子可達(dá)4g/L，并具有良好的可放大性（10ml-1000L）及工藝可重復(fù)性。應(yīng)用GEX®細(xì)胞系生產(chǎn)的多個(gè)項(xiàng)目已在美國(guó)和歐洲開(kāi)展臨床試驗(yàn)。